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ProDx® MSI检测试剂盒助力微卫星不稳定性类型及临床病理特征研究

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微卫星不稳定性(MSI)是由DNA错配修复(MMR)蛋白功能缺失所导致,其分子特征被认为是重要的基因标记物,为公认的结直肠癌的重要致癌途径之一,开展对MSI相关结直肠癌(MSI型结直肠癌)筛查、识别、治疗和预后的研究具有重要的临床应用意义,越来越受到重视。今天为大家介绍的是南方医科大学南方医院梁莉教授主导的一项关于微卫星不稳定性类型及临床病理特征研究成果,以及研究中的ProDx® 微卫星不稳定性(MSI)检测试剂盒的使用。
文章提到,有研究发现不同地区及不同人种发生突变的微卫星基因类型有差异。中国关于结直肠癌微卫星不稳定(MSI)和临床病理特征的相关性,缺少大样本数据分析,得出的结论不完全相同,特别是对于微卫星不稳定性结直肠癌错配修复蛋白各种缺失类型组合的数据总结,中国未见报道。同时对于MMR蛋白和MSI基因检测结果不一致的原因分析,国内文献也缺少数据分析。因此,梁莉教授的研究对2016~2018年确诊为结直肠癌病人1394例手术标本进行MMR蛋白免疫组化染色检测,并对其中299例进行MSI基因检测,探讨微卫星不稳定结直肠癌错配修复蛋白缺失的类型和临床病理特征,分析免疫组化与PCR-毛细管电泳检测结果的一致性,并对结果不一致的数据进行详细分析,为结直肠癌临床诊断、治疗和预后判断提供科学依据。
研究中的MSI检测
研究中MSI检测使用了上海普洛麦格生物产品有限公司生产的微卫星不稳定性(MSI)检测试剂盒(荧光PCR-毛细管电泳法)进行MSI检测。检测位点包括8个微卫星位点(NR-21、BAT-25、BAT-26、Mono-27、BAT-52、BAT-56、BAT-59、BAT-60),通过荧光PCR-毛细管电泳的方法对8个微卫星位点进行扩增以及比对正常组织与癌症组织中每个位点片段大小的变化来确定微卫星不稳定性。当癌组织微卫星片段大小与正常组织比较有≥3 pb 的差异,该微卫星位点不稳定。统计所有微卫星位点结果,当有≥2个微卫星位点不稳定,该癌组织样本判读为MSI-H;当只有1个微卫星位点不稳定,该癌组织样本判读为MSI-L;当没有微卫星位点不稳定,该癌组织样本判读为MSS。
PCR-毛细管电泳法和免疫组化法检测MSI结果比较
文章中的研究对106 例dMMR病例和193 例pMMR病例(包含46 例肿瘤细胞呈异质性表达的病例)进行了PCR-毛细管电泳法检测,发现IHC方法和PCR-毛细管电泳法检测方法结果不一致的病例有14例,我们对这14例标本选用了另一家公司抗体重做了4项MMR蛋白免疫组化并重新检测了其MSI状态,最终确定两种方法不一致的病例为4 例(表3)。文章分析了两种方法第一次检测结果有误的10 例样本,造成检测有误的原因主要有4种(表4):免疫组化染色弱导致误判为dMMR,免疫组化背景高导致误判为pMMR,标本污染导致PCR-CE结果为MSI-H,肿瘤细胞少导致PCR-CE结果为MSS。最终结果证实为MSI-H的有106例,MSI-L的有22例,MSS的有171例。最后通过对免疫组化和PCR-毛细管电泳法检测结果的比较,发现两者差异没有统计学意义(P=1.000),295例检测结果一致,两种方法检测结果的符合率为98.7%(表5);46例肿瘤细胞呈异质性表达的pMMR病例中,PCR-毛细管电泳法检测结果为MSS或者MSI-L的有44例,检测结果为MSI-H的有2例。
研究中的MSI检测结论
最终文章的讨论部分提到,研究证实MSI多由MMR蛋白表达缺失所致。因此,可通过检测MMR蛋白或MSI来反映微卫星状态。通过IHC法检测MMR蛋白和通过PCR法检测MSI是评估相同生物学效应的不同检测方法。IHC 法检测MMR蛋白是一种间接评估微卫星状态的方法。直接检测MSI状态的常用方法是多重荧光PCR毛细血管电泳法,这也是目前认可的金标准。作者通过对免疫组化和PCR-毛细管电泳法检测结果的分析发现两种方法对MSI的检出率显示高度的一致性,符合率达到98.7%,高于国内报道的95%左右。研究实验采用的ProDx® 微卫星不稳定性(MSI)检测试剂盒含长单核苷酸重复位点, 长单核苷酸重复位点有更长的位移,具有高突变频率和高检测灵敏度。
微卫星不稳定性(MSI)检测试剂盒
(荧光PCR-毛细管电泳法)
Advantages
技术创新与优势
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全球首款采用长单核苷酸重复位点的8位点试剂:它是全球首个采用新型长单核苷酸重复标志物(LMR)来检测微卫星不稳定性的产品,能够提供更清晰准确的分析结果。
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更高的灵敏度:相比传统的五位点检测系统,此产品显示出更高的灵敏度,尤其适合挑战性样本的分析。
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短片段设计:试剂盒中的8个单核苷酸重复标志物扩增均在200个碱基以内,使得高度降解样本的成功率更高。
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高效便捷:只需不到60分钟即可完成PCR扩增流程,且仅需2~5ng的样本量,大大提高了工作效率并减少了样本采集的压力。
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精准诊断:主要用于辅助鉴别结直肠癌中可能存在的林奇综合征,有助于提升患者的生存率,并实现对癌组织样本位点状态的精准判定。
更多产品信息可联系Promega分子诊断团队,索取下方产品介绍手册。
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公司电话丨010-58256268
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公司邮箱丨mdx@promega.com.cn
1. 正式获批 | 微卫星不稳定性 (MSI) 检测试剂盒获批国械注准20253400266。
2. 单核苷酸重复标记物用于微卫星不稳定性检测的方法学验证。
3.创新驱动,中国医疗器械行业迎来新机遇——上海普洛麦格MSI检测试剂盒助力精准医疗.
ABOUT PROMEGA
关于Promega公司
普洛麦格公司(Promega Corporation)是为生命科学行业提供创新解决方案和技术支持的领先者。公司拥有超过4,000种产品的产品组合,服务于细胞生物学、DNA、RNA及蛋白质分析、药物研发、人类身份鉴定、分子诊断等生命科学领域。过去45年间,这些工具与技术的应用范围持续扩展,目前被全球科研机构、法医部门、制药企业、临床诊断实验室,以及兽医、农业和环境检测领域的专业人员使用。普洛麦格总部位于美国威斯康星州麦迪逊市,在16个国家设有分支机构,并通过50余家全球经销商提供服务。更多信息请访问:promega.com


