在药物筛选和药效评价中，仅仅知道细胞“死或活”的终点结果早已不满足药物研发机构的需求。

现代药物研发需要回答更为复杂的问题：

• 先导化合物的起效时相如何？

• 联合用药是否产生协同效应？

• 药物在3D模型中的渗透动力学怎样？

如果不能捕捉细胞活力的动态变化，这些问题都无法被解答！

随着实时细胞活力检测技术的突破，正推动药效评估方式发生根本性转变。而通过实时监测技术，研究人员能够构建完整的药效动力学曲线，为候选化合物的优化提供前所未有的数据维度，从源头上提升研发成功率。

实时活力监测适用的研发场景

1.研究重点是“动力学过程”

需要了解一种药物或处理因素对细胞的作用是快速起效还是缓慢发生的。

2.研究对象是“3D模型”

使用类器官、肿瘤球体等更接近体内环境的3D模型进行药效评估或毒性测试时，传统比色法如cck8或MTT在3D结构中的渗透和扩散效率很低，无法获得有效数据。

3.从“珍贵样本”中获取多个时间点的数据

当细胞样本非常珍贵或难得（如原代细胞、患者来源的类器官），终点裂解法因为多次取样而浪费样本。

4.进行超过72小时超长时间实验

进行慢性毒性试验或长期药效观察。

若预算有限，或需要进行大规模、高通量的药物初筛，且只需要知道细胞处理最终结果的“是/否”或“百分比”结果，终点法细胞活力检测仍然是合适的选择。

主流实时活力监测技术对比

当实验室没有可以进行实时细胞活力监测的专用设备，也无需形态学分析时，RealTime-Glo™ MT Cell Viability是进行实时活力检测的最佳选择。

它有如下核心优势：

• 公认的细胞活力指标：检测细胞还原电位继而反映出细胞的代谢情况及数量；

• 实时监测：对细胞无毒，可在同一孔中72小时至更长时间实时监测细胞活力；

• 生物发光法更高灵敏度：比传统比色法或荧光法拥有更大的 S/B和灵敏度；

• 多重检测：无需裂解细胞，可以与其它检测试剂（包括其它不需要滤光片的发光检测）联用进行多重检测；

• 高通量药物筛选理想工具：适配 96/384/1536孔板，操作简单，仅需单次加样；

• 完美兼容3D类器官等模型：其良好的渗透性和实时检测的模式完美适配3D培养模型；

• 仅需具备发光检测模式的读板仪。

RealTime-Glo™ MT的检测原理

特异性底物前体能够被活细胞还原而转化为NanoLuc^®Luciferase底物并从细胞内扩散到周围的细胞培养基中，与NanoLuc^® Luciferase快速反应而产生发光信号。信号强度与活细胞数量呈正相关。

上图.使用RealTime-Glo™ MT Cell Viability Assay 实时监测药物EC₅₀。A549 细胞500 个/ 孔铺于384 孔板中，每孔40μl 细胞培养基中含有2 X RealTime-Glo™ 试剂。等体积2 X bortezomib 加入细胞。72h 监测发光信号。

实时活力监测高分应用文献

文献1：来自大阪国际癌症中心的科学家使用1134种FDA批准的药物，针对源于胆管癌PDCOs（患者来源的癌症类器官 ）的二维培养物进行了大规模药物初筛和复筛。采用RealTime-Glo™ MT Cell Viability Assay，3天内监测细胞随时间的增殖。计算第3天和第0天（起点）的发光测量值之间的比率，确定了显示出强烈生长抑制作用的孔（特别是那些比率≤1.0的孔）。 （PMID: 40078183 ）

文献2：法兰克福大学（歌德大学）耳鼻咽喉科的科学家对头颈肿瘤类器官模型进行了放疗敏感度体外评估。采用RealTime-Glo™ MT Cell Viability Assay每48 小时测量一次放疗后细胞活力，至 144 小时。 （PMID: 40045309）

文献3：来自意大利的科学家同样使用RealTime-Glo™ MT Cell Viability Assay在四种不同的水凝胶上测试生物打印的 BM-MSC（骨髓间充质干细胞）2周内随时间变化的细胞活力。 （PMID: 41002487）

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