抗体内化
Internalization
抗体药物偶联物(ADC)结合了单克隆抗体的特异性和细胞毒性药物的效力,以选择性杀伤癌细胞。为实现有效作用,ADC必须被内化并在细胞内转运以释放其载荷并避免脱靶效应。在开发早期了解内化动力学,有助于研究人员识别最具前景的候选分子,避免下游昂贵的失败并加快规模化生产。
pH Reactive Dyes
| pH反应性染料使ADC研究人员能够精确追踪抗体进入细胞的内吞过程。这些染料在酸性条件下如内吞体和溶酶体中发出荧光,提供了ADC传递效率的定量测量。这有助于评估和增强ADC的治疗潜力。参见这篇已发表文章中的更多数据:使用pH传感器荧光染料的均相微孔板模式抗体内吞测定法 |
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Antibody Internalization Bioassay
| 抗体内化生物测定为研究人员提供了监测抗体内化的终点读值。该检测基于NanoLuc®萤光素酶标记的抗Fc Fab片段与一抗或ADC治疗药物的结合。当一抗结合靶抗原后,复合物被内化,而未结合的抗体则被洗去。向细胞中加入检测试剂,该试剂包含膜不可透的NanoLuc®抑制剂(Bio-Glo-NL™ Glo-Guard)、膜不可透的NanoLuc®抑制剂缓冲液(Bio-Glo-NL™ Glo-Guard Buffer,图中黄色阴影区域)以及膜可透的萤光素酶底物。所产生的发光信号主要来自内化的Fab:一抗复合物。 | ![]() |
应用数据展示
抗体内化生物测定被用于量化两类ADC及非偶联版本抗体的内化情况
图A. Raji靶细胞与CD19特异性抗体loncastuximab、loncastuximab ADC以及对照IgG共同孵育。图B. SKOV3靶细胞与HER2特异性抗体trastuzumab、trastuzumab ADC以及对照IgG共同孵育。抗体内化生物测定适用于测量悬浮细胞(Raji)和贴壁细胞(SKOV3)类型中的内化情况。



